USB-IF在2000年4月27日推出了USB 2.0標準，至今已經有25年了。USB 2.0標準的出現正式將USB接口推向主流市場，提供了當時極快的數據傳輸速度，達到了480Mbps，比USB 1.1標準的12Mbps要快得多，提升了40倍，甚至比蘋果引以為傲的FireWire 400還要快。更重要的是，USB 2.0的成本比FireWire 400更低，加上支持熱插拔等特點，很快就成為了主板上的常客，直到現在還能看到。

雖然英特爾是制定USB 2.0標準的主要廠商之一，但是第一家使用USB 2.0的主板芯片組廠商是威盛（VIA）。威盛在2002年發佈了VT8235南橋芯片，與P4X333和KT333搭配使用。蘋果也在2003年開始支持USB 2.0，推出了配備新接口的Mac。英特爾直到2004年才發佈支持USB 2.0的主板芯片組，用於支持奔騰4處理器。

早期USB 2.0推廣的難題之一是缺乏廣泛的驅動程序支持，直到微軟在2022年8月發佈Windows XP Service Pack 1時，情況才得到改善。如果用户使用Windows 2000，要到2003年的Service Pack 4時才等來支持。儘管Windows 98第二版在世紀初的幾年裏依然流行，但是一直沒有USB 2.0的原生支持，需要第三方的驅動程序。

USB 2.0的出現取代了以往連接到計算機的並行和串行接口，體積更小巧更緊湊也更快，而且舊端口也不支持熱插拔，USB優勢明顯，對計算機具有劃時代的意義。USB-IF還提供了較小的USB連接器類型，包括Mini USB和Micro USB，使得像智能手機和平板電腦等便攜設備在使用上更加方便。